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          FISH(熒光原位雜交)

          發表時間:2022-02-22  |  點擊率:39

          FISH(熒光原位雜交)

          熒光原位雜交用于通過互補探針序列的雜交來顯示確定的核酸序列。FISH 有很多應用,從基本的基因定位到染色體畸變的診斷(細胞遺傳學)。多色 FISH 圖像分析需要使用單獨的濾光片激發塊(立方體)或激發濾光片轉輪結合多波段二向色鏡和發射濾光片來隔離各種信號。

          熒光免疫原位雜交(FISH)和 多路復用(Densely Multiplexed)成像的串色

          當同時使用具有多個密集光譜的熒光染料時,區分熒光標記的能力決定了檢測結果的速度和準確性。在進行熒光免疫原位雜交 (FISH)測量時,這種密集的圖像復用特別重要。因此,減少串色(即來自不希望的熒光染料的信號相對于所需熒光染料的信號影 響)至關重要。下表量化了使用特定的
          BrightLine 熒光免疫原位雜交(FISH)濾光片組時,相鄰熒光染料之間的串擾值。該串擾值 決定于典型的歸一化熒光染料光譜、濾光片的設計光譜和強金屬鹵化物燈光譜的重疊。

          這些結果已經針對每個給定的濾光片組進行了標準化,因此用戶應該讀取每行(而不是每列)的值以查看給定濾光片組的預期串擾值。

          例如,當使用 SpectrumGold™ 濾光片組對標記有 SpectrumGreen™、SpectrumGold™ 和 SpectrumRed™ 熒光染料的樣品進行 成像時,不需要的 SpectrumGreen 信號將小于所需要的 SpectrumGold 信號的 2%,并且 SpectrumRed 信號將小于1%。

          好的濾光片會帶來哪些不同 ?

          BrightLine“不易燒熔"濾光片在多年的使用中,在研究和臨床領域都得到了廣泛的測試。BrightLine 熒光免疫原位雜交 FISH 濾光片組也進行了嚴格的獨立測試。結果顯示:使用 BrightLine 濾光片組進行熒光免疫原位雜交 FISH 分析時,無論您是查找 和分析中期分裂,還是通過點計數對細胞進行評分,都可以提高分析的速度和準確性。

          熒光濾光片簡介

          一個分子吸收其吸收譜帶波長范圍(即吸收光譜)內的光,然后幾乎瞬間發出較長的、位于其發射譜帶波長范圍(即發射光譜)內的光,此時,就會發生光學熒光。為了達到分析的目的,強的熒光分子,亦被稱為熒光團、熒光染料,專門用于連接到生物分子或其他感興趣的目標,用于鑒定、定量、甚至實時觀察物質的生物和化學活性。熒光染料因為具有獨特的靈敏度、高特異性和簡單性,被廣泛應用于生物技術和分析檢測中。大多數熒光儀器,包括熒光顯微鏡,都是基于光學濾光片。

          一個典型的系統有三個基本的濾光片組成:激發濾光片(或吸收濾光片),二向色鏡分束鏡(或二向分色鏡)和發射濾光片(或阻擋濾光片)。激發濾光片通常是一個帶通濾光片,它只透過熒光染料的吸收波長,從而最大限度地減少熒光的其他來源的激發光和阻擋熒光發射帶內的激發光。二向色鏡分束鏡是一種邊緣濾光片,用于斜角入射 (通常是 45 °),以有效地反射激發波段的光和透射發射波段的光。Semrock 發射濾光片通常是一個帶通濾光片,僅透過熒光染料的發射波長,并阻擋這個波段之外的所有不需要的光 - 尤其是激發光。通過濾光片阻擋不需要的激發能量(包括紫外和紅外)或樣品和系統的自發熒光,就可以得到具有黑暗背景的熒光圖像。

          我們可以通過選擇適當的光學濾光片,組成一個濾光片組,用于觀察熒光或者對熒光進行成像,這樣就可以達到使一個給定的熒光染料可視化的目的。因為不同熒光染料的激發光譜和發射光譜不同,濾光片組需要優化,才可以用于不同熒光染料的同時成像。在不同的實驗條件下使用同一個熒光染料時,濾光片組也需要優化。




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